尖锐湿疣

　　HPV在皮肤上引起疣赘、在咽部、肛周、生殖器粘膜上形成增殖性病变，其病毒型为小型DNA病毒。感染HPV发生病变多数属于良性，能自行消退，但也有恶化病例。如肛周、生殖器粘膜上形成扁平上皮癌的报道。还有罕见的遗传性皮肤疾患、疣赘状表皮发育异常症(EV)续发的皮肤癌等，在癌细胞中检出HPV。

　　HPV为乳多空病毒科A属成员，病毒颗粒直径50-55nm无被膜的正20面体构成的病毒壳体，具有7900碱基对的环状双链DNA组成，电镜下病毒颗粒的大小、形态与口多瘤病毒极为相似。乳头瘤病毒(PV)具有种属特异性，HPV尚未能在组织培养或实验动物模型中繁殖。

　　病毒的结构蛋白组成：85%的PV颗粒，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS——PAGE)可确定病毒有主要衣壳蛋白、分子量为56.000;次要衣壳蛋白，分子量迁移于76.000处，发现4种细胞组蛋白与病毒DNA相关。

　　所有HPV病毒的基因组结构相似，根据在严格条件下进行DNA杂交的程序可确定病毒的型和亚型，不同的HPV型DNA与其他类型病毒DNA仅50%出现交叉杂交，迄今已发现60多种HPV类型，随着研究的深入，将会鉴定出更多HPV新的类型。

　　本病好发生于性活跃的中青年。潜伏期一般为1～8个月，平均为3个月。外生殖器及肛门周围皮肤黏膜湿润区为好发部位，男性多见于龟头、冠状沟、包皮系带、尿道口、阴茎部、会阴，同性恋者多见于肛门及直肠内，女性多见于大小阴唇、阴道口、阴蒂、阴道、宫颈、会阴及肛周;少数患者可见于肛门生殖器以外部位(如口腔、腋窝、乳房、趾间等)。皮损初起为单个或多个散在的淡红色小丘疹，质地柔软，顶端尖锐，后渐增多增大，依疣体形态可分为无柄型(即丘疹样皮损)和有柄型，后者可呈乳头状、菜花状、鸡冠状及蕈样状;疣体常呈白色、粉红色或污灰色，表面易发生糜烂，有渗液、浸渍及破溃，尚可合并出血及感染(图32-1);多数患者无明显自觉症状，少数可有异物感、灼痛、刺痒或性交不适。宫颈部位疣体通常较小，界限清，表面光滑或呈颗粒状、沟回状，妊娠时可明显增大增多。少数患者疣体过度增生成为巨大型尖锐湿疣(Buschke-loewenstein肿瘤)，常与HPV-6型感染有关，部分可发生恶变。

　　少数患者表现为潜伏感染或亚临床感染。前者局部皮肤黏膜外观正常且醋酸白试验阴性，但通过分子生物学方法可检到HPV的存在，目前认为HPV潜伏感染是尖锐湿疣复发的主要原因之一;后者表现为肉眼不能辨认的皮损，醋酸白试验阳性，亚临床感染的存在和再活动也与本病复发有关。

　　一、流行情况

　　尖锐湿疣为人类乳头瘤病毒所引起。目前一致认为此病在增多，成为STDS中的最常见疾病，在年轻成人中患病率可达0.5%-1%。英国尖锐湿疣发病率从1970年的30/10万增到1988年的260/10万，几乎增加了8倍，美国此病发病率从1966年到1984年增加了6倍。和艾滋病相似，有症状的尖锐湿疣仅代表感染者的“冰山”之顶，所以如考虑亚临床感染在内，人类乳头瘤病毒感染可能是发病率占第一位的性病。此感染的传播方式包括直接与间接传播，但以性接触最为常见，而且越是近期损害越有传染性，一次性接触估计有50%被传染的可能性;其次为直接非性接触，如自体传染以及新生儿经产道受染;再其次为间接接触，通过污染传染、推测有可能，但因此病病毒尚不能培养，未能证实。

　　二、尖锐湿疣发生的危险因素

　　(一)性行为：性伴数及过早性交是造成发生HPV感染的因素。

　　(二)免疫抑制：HPV感染和与HPV有关的癌似乎是慢性免疫功能抑制的晚期并发症。肾异体移植者中患CA的危险性增加。

　　(三)HIV感染：HIV阳性发生HPV感染及HPV相关肿瘤的机率增加。

　　(四)年龄，妊娠：在妇科涂片中检测HPV高峰流行率的年龄为20-40岁，随着年龄增加，流行率稳步下降;妊娠期间的HPV检出率高，产后HPV检出率下降。

　　典型表现为表皮乳头瘤样增生伴角化不全，颗粒层和棘层上部细胞可有明显的空泡形成，胞质着色淡，核浓缩深染，核周围有透亮的晕(凹空细胞)，为特征性改变;真皮浅层毛细血管扩张，周围常有较多炎性细胞浸润。

　　一、醋酸白试验

　　用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。

　　二、免疫组织学检查

　　常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP)，显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。

　　三、组织化学检查

　　取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。

　　四、病理检查

　　主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状癌。

　　五、基因诊断

　　迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。

　　(一)标本的采集及处理

　　1.标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心(3000g，10min)洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。

　　2.标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/l Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA，150mmol/L NaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10体积3mol/l NaAc(pH 5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/l Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA)溶解DNA，37℃温育30min。

　　(二)PCR扩增

　　1.引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L)，每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPv 6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。

　　Manos等设计的HPVL1通用引物

　　MY11：GCMCAGGGWCATAAYAATGG

　　MY09：CGTCCMARRGGAWACTGATC

　　2.PCR反应试剂：Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/l dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L)，10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5)，100μmol/L MY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。

　　3.PCR扩增方法和程序：以100μl PCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。

　　4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒(每反应为100pg)或含有HPV的细胞系(如Caski、HeLa)DNA为阳性对照，以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。

　　(三)扩增产物的检测和分析

　　1.凝胶电泳：扩增反应结束后，取出反应管，冷却至室温，取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下分析结果，分子量约为450bp处出现明显的DNA带。

　　2.核酸杂交：如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时，可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。

　　按照标准方法制32p ATP标记的寡核苷酸探针，需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h，随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜，除去多余探针。然后进行洗膜，其条件依所用探针而异：公用混合探针，55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探针，56-57℃下10min，并换液重洗1次;MY14及WD74探针，58-59℃下10min，亦换液重洗1次。

　　用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果，可检出标本中200个拷贝的HPv DNA，若以核酸杂交检测PCR产物，敏感性提高，能检出10个拷贝的HPv DNA。

　　鉴于PCR技术的高度敏感性，以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求，避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下，PCR扩增产物经凝胶电泳，观察产生的DNA可直接作出诊断。因此，PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。

　　本病主要根据病史(性接触史、配偶感染史或间接接触史等)、典型临床表现和实验室检查结果(醋酸白试验、组织病理检查)进行诊断。本病需和假性尖锐湿疣、阴茎珍珠状丘疹、扁平湿疣、鲍温病样丘疹病、生殖器鳞状细胞癌和皮脂腺异位症等进行鉴别。

　　(1)假性湿疣(pseudo condyloma)：常发生在女性小阴唇内侧及阴道前庭，为白色或淡红色小丘疹，表面光滑，对称分布，无自觉症状;醋酸白试验阴性。

　　(2)阴茎珍珠状丘疹(pearly penile papules)：发生在男性龟头冠状沟边缘的细小圆锥状、排列成单行或多行的、白色或淡红色小丘疹，不融合，无自觉症状;醋酸白试验阴性。

　　(3)扁平湿疣：为二期梅毒特征性皮损，发生在肛门生殖器部位的多个或成群的红褐色蕈样斑块，表面扁平，基底宽，无蒂，常糜烂、渗出;皮损处取材在暗视野下可查到TP;梅毒血清学反应强阳性。

　　1.外用药物治疗

　　(1)0.5%足叶草毒素酊(鬼臼毒素酊)：为抗病毒有丝分裂药物。用法为每天2次外用，连用3天停药4天为1个疗程，可根据病变程度连续用1～3个疗程，治愈率较高。适用于任何部位的皮损(包括男性尿道内及女性阴道内皮损)，但应注意其致畸作用，孕妇禁用。

　　(2)10%～25%足叶草酯酊：每周1～2次局部外用，涂药1～4小时后洗去。因刺激性较大，故应注意保护皮损周围正常组织;本药有致畸作用，孕妇禁用。

　　(3)50%三氯醋酸或二氯醋酸液：可通过对病毒蛋白的凝固作用破坏疣体，使疣组织坏死脱落。每周或隔周使用1次，连续用药不宜超过6周。有腐蚀性，应注意保护正常组织。

　　(4)其他：5% 5-氟尿嘧啶每周外用1次;或5%咪喹莫特每周外用2～3次，睡前外用，6～10小时后洗掉，可用药16周，局部可出现轻中度刺激症状。

　　2.物理治疗 如激光、冷冻、电灼、微波等，可酌情选用，巨大疣体可手术切除。

　　3.内用药物治疗 可配合使用干扰素。

　　控制性病是预防CA的最好方法。发现治疗患者及其性伴;进行卫生宣教和性行为的控制;阴茎套具有预防HPV感染的作用，目前尚无有效疫苗。